【飞诺美色谱】RP-LC-MSMS法定量mRNA中游离非结合核苷

时间: 2024-02-05 13:53:55 |   作者: 安博体育入口

  这种办法能够检测和定量组成类mRNA中大大都润饰的核苷。这不只包含在体外转录过程中有意经过三磷酸盐引进的润饰，还包含商业化NTP质料改变引进的杂质，核苷被氧化发生的杂质等。该办法还能检测从帽结构开释的m7G或核糖甲基化润饰。运用LC-MS/MS，能够在核苷水平上剖析mRNA，从而在单次运转中检测和量化数十种不同的润饰核苷。该办法能够很容易地对体外转录的NTP进行质量操控。

  用0.6U的核酸酶P1、0.2U的蛇毒磷酸二酯酶、0.2U的牛肠磷酸酶和10U的Benzonase核酸酶，在5mM Tris （pH8）和1mM氯化镁溶液中，37℃酶解2小时，将10μg的RNA酶切至核苷水平。别的，能够挑选性地增加脱氨酶抑制剂，如喷司他汀（腺苷脱氨酶抑制剂，200ng）和四氢尿苷（胞苷脱氨酶抑制剂，500ng），以防止核苷降解。

  ESI参数：气体温度300℃，气体流量7L/min，雾化器压力60psi，鞘气温度400°C，鞘气流量12L/min，毛细管电压3000v，喷嘴电压0v

  QQQ参数：取决于有必要检测的润饰核苷。主张对每台质谱仪的仪器参数（破碎器、磕碰能量、加快器电压）来优化，以到达最佳灵敏度

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